深圳市芬析儀器制造有限公司針對(duì)非洲豬瘟病毒特研發(fā)了CSY-E96D非洲豬瘟病毒快速診斷儀，該儀器采用固相酶聯(lián)免疫吸附ELISA的原理,即酶聯(lián)免疫法；可定量快速畜牧類疾病診斷如非洲豬瘟、禽流感、豬瘟、豬藍(lán)耳、偽狂犬等疾病，非洲豬瘟病毒快速診斷儀廣泛應(yīng)用于養(yǎng)殖場(chǎng)、屠宰場(chǎng)、肉產(chǎn)品深加工企業(yè)、檢驗(yàn)檢疫單位使用。
自從2018年8月以來，非洲豬瘟疫情在我國(guó)來勢(shì)洶洶，盡管采取了嚴(yán)厲措施予以防控，但疫情仍在持續(xù)發(fā)酵中。
事實(shí)上，在整個(gè)產(chǎn)業(yè)鏈中，從生豬養(yǎng)殖到餐桌，要切實(shí)防控疫情，涉及到眾多監(jiān)管部門，離不開多方的群策群力，單靠一個(gè)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部是無法解決全程問題的。
根據(jù)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部的通報(bào)，盡管“我國(guó)發(fā)生非洲豬瘟疫情以來，所有已發(fā)疫情均已得到及時(shí)有效處置，目前疫情呈點(diǎn)狀發(fā)生，總體可控”，但也承認(rèn)“非洲豬瘟病毒在我國(guó)已形成了一定污染面，傳統(tǒng)的生產(chǎn)、流通、消費(fèi)方式短期內(nèi)難以根本改變，疫情傳播途徑錯(cuò)綜復(fù)雜，風(fēng)險(xiǎn)難以完全阻斷，且目前尚無有效疫苗，以上因素共同決定了防控工作的復(fù)雜性和長(zhǎng)期性”。
非洲豬瘟病毒快速診斷儀樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7.不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
非洲豬瘟病毒快速診斷儀操作步驟：
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置陰、陽性對(duì)照孔和樣本孔，陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照各50μL；
3.待測(cè)樣本孔加待測(cè)樣本10μL，樣本稀釋液40μL；
4.隨后陰、陽性對(duì)照孔和樣本孔中每孔加入非洲豬瘟病毒快速診斷儀辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗原100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光水浴鍋孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在非洲豬瘟病毒快速診斷儀450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
